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去除融合蛋白标签的首选TEV蛋白酶——看这里


  专题推荐     |      2023-11-08
大家好,我是蛋白工具酶家族的新成员,我的名字叫“重组烟草蚀纹病毒蛋白酶(rTEV Protease)”,今天跟大家做个自我介绍:
产品描述
重组TEV蛋白酶(rTEV Protease)经过基因工程改造,在大肠杆菌中重组表达,带His标签(6X His tag),不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEVProtease是一种用来切除融合蛋白上标签序列的常用工具酶,较EK、SUMO等蛋白酶的位点专一性更强,具有高活性和高特异性的特点。
品牌
货号
包装规格
比活
Seebio®
EBY3644A-1KU
酶:1×1KU、Buffer:1×1.5ml
1U/μL
Seebio®
EBY3644A-5KU
酶:1×5KU、Buffer:2×1.5ml
5U/μL
Seebio®
EBY3644A-10KU
酶:2×5KU、Buffer:4×1.5ml
5U/μL
产品特点
严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。其序列专一性远比凝血酶、因子xa、肠激酶等蛋白酶高TEV蛋白酶可在广泛pH(6.0-8.5)和温度(4-30℃)内进行酶切,使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。rTEV酶在pH 7.0,30℃时可达到最佳活性。
产品应用
用于切除重组蛋白的融合标签。rTEV酶的N端含有6×His,酶切结束后可以通过Ni2+亲和层方便地去除rTEV,以达到纯化目的蛋白的目的。
产品属性
来源(Source)
大肠杆菌重组表达
外观(Appearance)
无色透明液体
分子量
27.8kDa
比活力(Specific Activity)
1U/μL1 5U/μL
活性定义(Unit Definition)
在1×rTEV Buffer(50 mM Tris,pH 8.0,0.1 mM EDTA,1 mM DTT)中,30℃反应1 h,剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
纯化(Purification)
色谱纯化
纯度(Purity)
≥95%(by SDS-PAGE)
产品组成
25mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,5mM DTT, 50%(v/v)Glycerol, pH8.0。
表1. 不同温度下rTEV酶切活性
反应时间(h)
不同温度下剪切活性(%)
4℃
16℃
21℃
30℃
1
34
58
56
70
2
58
80
78
90
3
71
99
99
99
3.5
84
99
99
99
应用举例
组分
用量
融合蛋白
30μg
rTEV Protease (1 U/μL)
10μL
rTEV buffer(10×)
10μL
ddH2O
随终体积变动
1.按如上表格配制反应体系。
 2.混匀后在30℃条件下温育,分别在1h、2h、4h、6h后取样,置于单独的EP管中。
 3.向上述EP管中加入适量的 5×SDS Loading Buffer,-20℃保存至酶切完成。
 4.取酶切样品进行SDS-PAGE电泳分析,确定酶切效果,调整所需的合适酶量和反应时间。
 5.如果目的蛋白在30℃不稳定,可以于4℃反应过夜(16小时左右)。
运输与保存
低温运输,-20℃保存,有效期≥2年。
影响天然TEV酶活性的常见因素:
1)PMSF和AEBSF(1 mM),TLCK(1 mM),Bestatin(1 mg/mL),EDTA(1 mM),PestatinA(1 mM)以及E-64(3 mg/mL),以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响;
2)Zn2+浓度(>5 mM)对rTEV活性有抑制作用;
3)与半胱氨酸反应的试剂,也是rTEV的潜在抑制剂。
常见问题
Q:该产品有何优点?
 A:重组型TEV 蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅有天然 TEV 酶活性,同时不会出现天然TEV酶的自我酶解问题,在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。
Q:该产品可用于什么实验?、
 A:rTEV 是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性。
Q:该产品的最适酶切时间和温度是多少?
 A:16-30℃下反应 3-3.5h 最好。
特别推荐
Seebio® TEV 蛋白酶(TEV Protease)活性测定试剂盒(荧光法)
货号
中文名称
包装规格
EKM0101B-50T
Seebio® TEV 蛋白酶(TEV Protease)活性测定试剂盒(荧光法)
50T
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中文名称
包装规格
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重组蛋白A(rProtein A)-层析填料专用
10mg
ECL0019H-100mg
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100mg
ECL0019H-1g
重组蛋白A(rProtein A)-层析填料专用
1g
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重组蛋白A(rProtein A)-层析填料专用
1Kg
重组肠激酶
货号
中文名称
包装规格
ECE1123A
重组肠激酶
100U
ECE0616D-1KU
凝血酶
1KU(2000U/mg)
AJL0940C
Seebio® 线性聚乙烯亚胺(PEI 40,000)
10mg

 

大家好,我是蛋白工具酶家族的新成员,我的名字叫“重组烟草蚀纹病毒蛋白酶(rTEV Protease)”,今天跟大家做个自我介绍:
产品描述
重组TEV蛋白酶(rTEV Protease)经过基因工程改造,在大肠杆菌中重组表达,带His标签(6X His tag),不仅保持天然TEV酶的功能活性,且在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。rTEVProtease是一种用来切除融合蛋白上标签序列的常用工具酶,较EK、SUMO等蛋白酶的位点专一性更强,具有高活性和高特异性的特点。
品牌
货号
包装规格
比活
Seebio®
EBY3644A-1KU
酶:1×1KU、Buffer:1×1.5ml
1U/μL
Seebio®
EBY3644A-5KU
酶:1×5KU、Buffer:2×1.5ml
5U/μL
Seebio®
EBY3644A-10KU
酶:2×5KU、Buffer:4×1.5ml
5U/μL
产品特点
严格识别七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S),切割位点在谷氨酰胺和甘氨酸/丝氨酸之间。其序列专一性远比凝血酶、因子xa、肠激酶等蛋白酶高TEV蛋白酶可在广泛pH(6.0-8.5)和温度(4-30℃)内进行酶切,使得反应条件的选择可根据目的蛋白的情况而灵活变动。rTEV酶在pH 7.0,30℃时可达到最佳活性。
产品应用
用于切除重组蛋白的融合标签。rTEV酶的N端含有6×His,酶切结束后可以通过Ni2+亲和层方便地去除rTEV,以达到纯化目的蛋白的目的。
产品属性
来源(Source)
大肠杆菌重组表达
外观(Appearance)
无色透明液体
分子量
27.8kDa
比活力(Specific Activity)
1U/μL1 5U/μL
活性定义(Unit Definition)
在1×rTEV Buffer(50 mM Tris,pH 8.0,0.1 mM EDTA,1 mM DTT)中,30℃反应1 h,剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定义为一个活性单位。
纯化(Purification)
色谱纯化
纯度(Purity)
≥95%(by SDS-PAGE)
产品组成
25mM Tris-HCl,150mM NaCl,1mM EDTA,5mM DTT, 50%(v/v)Glycerol, pH8.0。
表1. 不同温度下rTEV酶切活性
反应时间(h)
不同温度下剪切活性(%)
4℃
16℃
21℃
30℃
1
34
58
56
70
2
58
80
78
90
3
71
99
99
99
3.5
84
99
99
99
应用举例
组分
用量
融合蛋白
30μg
rTEV Protease (1 U/μL)
10μL
rTEV buffer(10×)
10μL
ddH2O
随终体积变动
1.按如上表格配制反应体系。
 2.混匀后在30℃条件下温育,分别在1h、2h、4h、6h后取样,置于单独的EP管中。
 3.向上述EP管中加入适量的 5×SDS Loading Buffer,-20℃保存至酶切完成。
 4.取酶切样品进行SDS-PAGE电泳分析,确定酶切效果,调整所需的合适酶量和反应时间。
 5.如果目的蛋白在30℃不稳定,可以于4℃反应过夜(16小时左右)。
运输与保存
低温运输,-20℃保存,有效期≥2年。
影响天然TEV酶活性的常见因素:
1)PMSF和AEBSF(1 mM),TLCK(1 mM),Bestatin(1 mg/mL),EDTA(1 mM),PestatinA(1 mM)以及E-64(3 mg/mL),以上这些蛋白酶抑制剂对rTEV的活性没有影响;
2)Zn2+浓度(>5 mM)对rTEV活性有抑制作用;
3)与半胱氨酸反应的试剂,也是rTEV的潜在抑制剂。
常见问题
Q:该产品有何优点?
 A:重组型TEV 蛋白酶(rTEV)是经过基因工程改造和纯化后的重组蛋白酶,不仅有天然 TEV 酶活性,同时不会出现天然TEV酶的自我酶解问题,在广谱的温度范围内表现出更强的稳定性和特异性。
Q:该产品可用于什么实验?、
 A:rTEV 是一种用来切除融合蛋白上亲和标签的常用工具酶,具有很强的位点特异性。
Q:该产品的最适酶切时间和温度是多少?
 A:16-30℃下反应 3-3.5h 最好。
特别推荐
Seebio® TEV 蛋白酶(TEV Protease)活性测定试剂盒(荧光法)
货号
中文名称
包装规格
EKM0101B-50T
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50T
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10mg
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100mg
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1g
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1Kg
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包装规格
ECE1123A
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100U
ECE0616D-1KU
凝血酶
1KU(2000U/mg)
AJL0940C
Seebio® 线性聚乙烯亚胺(PEI 40,000)
10mg