PNGase F重组糖苷酶

PNGase F是一种酰胺酶，切割糖蛋白上的N-连接糖，切割的糖型有：高甘露糖、杂合和复杂寡糖，切割位点为：最内侧的N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之间。使得糖蛋白释放以天冬酰胺连接的糖分子，并使得天冬酰胺转化为天冬氨酸本公司PNGase是E.coli重组表达，并经多步纯化制备的重组蛋白。可以提供不含甘油形式，便于在HPLC方法中取得最佳效果。

【酶活定义】 一个单位是指10μL的反应体系中，37°℃反应1小时从10μg变性RNase B中除去超过95%的碳水化合物所需要的酶量。

【产品组分】

 ‍‍PNGase F；10×变性缓冲液；10×糖苷酶缓冲液；10%NP-40

【使用方法 仅供参考】

 变性酶切

1、制备变性糖蛋白 2-20μg糖蛋白，2μl 10×糖蛋白变性Buffer，并用去离子水定溶至20μl，100度加热10 min变性糖蛋白，然后放在冰上冷却5 min，最后离心10秒。

2、去离子水溶解2-20μg变性糖蛋白，加入2μl 10×糖苷酶切缓冲液，2μl 10% NP40，500-1000U PNGase F，并用去离子水定溶至20μl。37°℃孵育1h，75℃×15min失活酶，进行SDS-PAGE或HPLC分析。

非变性酶切

去离子水溶解一定量糖蛋白，加入2μl 10×糖苷酶切缓冲液，500-1000U PNGase F，并用去离子水定溶至20μl，37°℃孵育4h-24h，75℃×15min失活酶，进行SDS-PAGE或HPLC分析。