Seebio® TEV 蛋白酶（TEV Protease）活性测定试剂盒（荧光法）

Seebio® TEV 蛋白酶（TEV Protease）活性测定试剂盒(荧光法)

 

EKM0101B

 

 

 

TEV蛋白酶（烟草蚀刻病毒蛋白酶）是一种半胱氨酸蛋白酶，识别序列为Glu-X-X-Y-X-Gln-Gly/Ser，裂解位于Gln和Gly/Ser之间。本试剂盒基于TEV蛋白酶的特异性底物肽被切割后形成稳定、高荧光、低背景的荧光产物，通过检测386nm激发光下，480nm发射光的荧光强度，再利用标准曲线准确定量出TEV蛋白酶的活性。本品可用于检测样本中TEV蛋白酶活性或TEV酶残留量。

 

1.本试剂盒简单、快速，适合纯品及组织裂解液上清中TEV酶活性的定量检测；

2.TEV 酶活性的线性检测范围为0.1~ 1.0 U/μl；

3.本品具有稳定、高荧光、低背景特征。

 

请事先准备好无菌离心管、恒温培养箱或水浴锅、微量移液器、荧光酶标仪等。 

 

1. 标准品溶液制备：取一支TEV酶标准品，2000~3000rpm离心30s，将液体集中于管底，首孔不加稀释液，直接取加10μl标准品；后续取4支稀释管，每管加入25μl的稀释液后，再取25μl的标准品（1U/μl）加入首支稀释管中、用移液器反复吹吸混合5次后，取25μl加入下一管，依次做4次倍比稀释；最后制成1.0、0.5、0.25、0.125和 0.0625 U/μl的5个不同浓度标准品溶液。

 

2. 样品准备：将待测样品中TEV酶的活性浓度调整到0.1 ~ 1.0 U/μl。

 

3. 底物溶液准备：取一支底物液，轻微离心收液至管底，加入300μl稀释液，混匀，离心备用。

 

4. 取黑色96孔反应板，各孔做好标记，并按下表配制反应液（每个检测样品设2个复孔）：

 

 

5. 检测流程：

（1）将微孔板置于30℃恒温孵育30min；

（2）孵育完成后，加入终止液，50μl /孔，混匀；

（3）加入100μl 溶液A，混匀；再加50μl 溶液B，混匀，静置2min后进行荧光酶标仪检测；

（4）荧光酶标仪检测参数为：激发波长386nm，发射波长480nm。

 

6. 数据分析：

计算各孔净荧光值（检测值减去空白对照）和各组平均净荧光值，绘制标准曲线。根据标准曲线计算获得样品活性值。

 

1.本试剂盒仅供研究使用。

2.打开启用后，放至2-8℃，建议1-2周内使用完。

3.低温可致溶液A有结晶析出，用前请温浴溶解。

4.溶液B每次加取后要迅速旋盖密封，防止污染。

 

2-8℃储存，有效期12个月。

 

1.获得测定值，计算平均净荧光值

 

 

 

2.绘制标准曲线，拟合标准方程式

 

 

 

3.根据标准方程，计算样品活性浓度

 

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